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                                          新聞資訊
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                                          血液分析儀的檢測原理及臨床應用

                                          發表時間:2019-11-06

                                           ( 本文轉載自在線微信平臺,版權屬于原作者。特別說明本文所有內容出于非商業性目的,僅用于學習交流和分享。如涉及版權等問題,請原作者直接聯系我們,我們將在第一時間進行更正或刪除,謝謝!聯系郵箱:sjzyubaoxiang2013@163.com )

                                           

                                           

                                           

                                          50年代,美國W.H.Coulter在世界上研發了第一臺血液分析儀Automated hematology analyzer(AHA)?,F代血液分析儀按功能可分為:全血細胞計數、白細胞分類、血細胞計數和分類功能的擴展。

                                          一、檢測原理及技術

                                           

                                          1、電學檢測原理及技術

                                          ①電阻抗法原理

                                           

                                          ②儀器的組成和功能

                                          信號發生器               

                                          放大器

                                          閾值調節器               

                                          甄別器

                                          整形器                     

                                           

                                          計數器
                                          放大→閾值調節→甄別→整形→計數

                                           

                                          ③電阻抗原理進行血細胞計數和分類原理圖(見下)

                                           

                                           

                                          特點:是最早的血細胞計數理論

                                          缺點:不能對單個細胞進行系統分析,得出的參數為群體平均值。

                                           

                                           

                                          2、射頻電導法

                                           

                                          射頻指射頻電流,是每秒變化大于10000次的高頻交流電磁波。電導性即電的傳送性能。高頻電流能通過細胞壁,滲入細胞膜脂質層可測定細胞的導電性,提供細胞內部化學成分、細胞核和細胞質、顆粒成分等特征性信息。

                                           

                                          用途:特別有助于鑒別體積雖相同、但內部結構性質不同的細胞(或相似體積的顆粒)。

                                           

                                          3、光(化)學檢測原理

                                           

                                          激光散射法

                                          ①原理:處理細胞(稀釋、染色、球形化)→ 通過石英毛細管(激光束照射)→ 細胞產生與其特征相應的各種角度的散射光 → 周圍有不同角度的信號檢測器

                                           

                                          不同結果角度代表的意義如下:

                                          前向散射光(FSC):數量和表面體積大小

                                          側向散射光(SSC):顆粒、細胞核等復雜性

                                          散射熒光(FL):FL1綠色,FL2橘紅色,FL3紅色

                                          激光散射法是現代五分類血液分析儀的主要檢測原理之一。

                                           

                                          ②基本組成

                                          光源:氣體激光(氦-氖、氬氣等)、固體激光(半導體)、鎢光源(多色光)

                                          鞘流:維持顆粒于液流中央,順序、單個、恒速向前流動,即流體動力學聚焦

                                          細胞懸液:被檢測細胞(顆粒)的懸液,由氣壓導入流動池

                                          光檢測器:接受來自各種角度的散射光或吸收光信號,并轉換成相應特征的電信號

                                           

                                           

                                          功能水平上對單個細胞進行定量分析,可高速分析上萬個細胞,并能同時從一個細胞中測得多個參數,是最先進的細胞定量分析技術。

                                           

                                          ③網織紅細胞檢測原理

                                          利用流式細胞儀(flow cytometer,FCM)的方法進行網織紅細胞計數。因網織紅細胞的胞質中尚殘留RNA,可與丫啶橙、哌若寧-Y、噻唑橙等染料結合,應用FCM測量發出的特定顏色熒光,進行RNA定量。

                                           

                                          分光光度法

                                          ①原理:遵循Lambert-Beer比色定律,即吸光度A與液體物質濃度C成正比。

                                          ②組成:單色光源、檢測池和比色容器、光檢測器。

                                          ③血紅蛋白測定:溶血劑→ 紅細胞溶解 → Hb → 與溶血劑中某些成分結合 → 穩定的血紅蛋白衍生物 → 530~550nm → 比色。

                                           

                                          4、不同的儀器組合應用電學、光、化學檢測技術

                                           

                                          血液分析儀常用檢驗參數的原理和技術

                                           

                                           

                                           

                                           

                                          白細胞五分類計數及相關參數檢測

                                          ①過氧化物酶(peroxidase)染色通道檢測原理

                                           

                                           

                                          ②體積、電導和光散射(VCS)法

                                          VCS:Volume,Conductivity,lightScatter

                                          電阻抗技術 →細胞體積、數量

                                          電導技術→ 內部結構性質不同的細胞

                                          光散射技術 →細胞內的顆粒性、核分葉性、核表面結構

                                           

                                           

                                           

                                          VCS技術下各種白細胞群的特征

                                           

                                          ③多角度偏振光散射法(MAPSS)

                                           

                                           

                                          血標本經鞘液稀釋后→WBC近似自然狀態→Hb溢出,鞘流水分子則進入RBC →不干擾白細胞檢測→多角度偏振光散射法分4個角度檢測

                                          0°:反映細胞大小,同時檢測細胞數量

                                          7°:反映細胞內部結構及核染色質的復雜性。

                                          90°:反映細胞內部顆粒及分葉狀況。

                                           

                                          90°D:在光散射過程中,嗜酸性粒細胞顆粒豐富,可去偏振光,與中性粒細胞鑒別。

                                          優點:可鑒別白細胞亞群、異常細胞類型;白細胞分類不受有核紅細胞、血小板凝聚、不溶解紅細胞和細胞碎片等干擾物質影響。

                                           

                                          成熟紅細胞系列參數檢測原理

                                          電阻抗法

                                          流式細胞術、鞘流電阻抗法

                                          流式細胞術激光散射法

                                          電阻抗法和光散射法

                                           

                                          血小板系列參數檢測原理

                                          電阻抗法

                                          流式細胞激光核酸熒光染色和電阻抗法

                                          激光散射法

                                          固體激光散射法、電阻抗法和單克隆抗體熒光染色散射法 

                                           

                                          網織紅細胞系列參數檢測原理

                                          非熒光染料染色法:新亞甲藍

                                          熒光染料染色法:噁嗪、堿性槐黃O、聚次甲基、噻唑橙、氧氮雜芑750等。

                                           

                                           

                                          有核紅細胞系列參數檢測原理

                                          VCS法

                                          流式激光/熒光染色法

                                          白細胞計數和分類通道衍生法

                                          阻抗法和噻唑橙熒光染色流式細胞術

                                           

                                           

                                          二、結果顯示

                                           

                                          1、數據

                                           

                                           

                                           

                                          2、圖形

                                           

                                          血細胞直方圖:

                                          即細胞體積分布圖形,橫坐標為細胞體積大小,縱坐標為一定體積的細胞數目。

                                          ①白細胞直方圖

                                           

                                          紅細胞直方圖

                                          ③血小板直方圖

                                           

                                          散點圖:

                                          平面散點圖只顯示2維(X、Y軸)圖像,在坐標系,X軸和Y軸分別表示一種檢測原理或檢測角度的細胞信息,在坐標象限中的任何一個散點反映的就是X軸和Y軸的綜合信息。

                                          在不同的檢測原理下,坐標上散點的位置如:上下(高低)、左右、前后(可重疊)或散點群的疏密,均與相應類別的細胞外形、體積大小、內部結構、胞核胞質、顆粒數量等理化特性密切相關。

                                          異常散點圖包括病理性和非病理性干擾物質的影響,散點圖需要結合臨床和檢驗分析前、中、后仔細分析,作出合理的解釋。

                                           

                                          3、臨床意義

                                           

                                          紅細胞參數

                                          ①紅細胞體積分布紅細胞參數寬度(RDW)

                                           

                                           

                                          ②紅細胞血紅蛋白分布寬度(HDW)

                                          HDW反映紅細胞內HGB含量異質性的參數,HDW和RDW明顯增高,見于遺傳性球形紅細胞增多癥,屬于小細胞不均一性高色素性貧血。HDW對鐮形細胞貧血、β-輕型珠蛋白生成障礙性貧血也有一定診斷意義。

                                           

                                          ③有核紅細胞(NRBC)

                                          新生兒、胎兒可見,健康成人不見

                                           

                                          網織紅細胞參數

                                          ①未成熟網織紅細胞比率IRF

                                          概念:是指幼稚的或未成熟的網織紅細(即含高RNA的網織紅細胞)與總的網織 紅細胞的比值,既IRF= (MFR+HFR)/(LFR+MFR+HFR)

                                          意義:骨髓抑制時,HFR、MFR減低(IFR)早于LFR、N、PLT;恢復時HFR、MFR (IFR)迅速增高。

                                          ②網織紅細胞成熟指數RMI

                                          公式:RMI=(MFR+HFR)/LFR

                                          評價:增高:常見于溶血性貧血、特發性血小板減少性紫癜、白血病、真性紅細胞增多癥和多發性骨髓瘤。

                                          減低:常見于與骨髓衰竭或無效造血有關,如巨幼細胞性貧血、再生障礙性貧血。

                                          ③網織紅細胞血紅蛋白量RET-He

                                          概念:指網織紅細胞內血紅蛋白的含量  

                                          公式:CHr=MRV × CHCMr

                                          評價:反映網織紅細胞的質量變化,Ret-He達30.5pg為患者需要補充鐵的最佳臨界值,其靈敏度和特異性高,與CHr有很好的相關性。

                                          ④網織紅細胞平均血紅蛋白量CHr

                                          概念:平均每個網織紅細胞所含血紅蛋白的量  

                                          公式:CHr=MRV × CHCMr,單位:pg

                                          評價:反映網織紅細胞內的鐵含量,可實時評價骨髓紅系的功能狀態。

                                          白細胞參數

                                          ①中間細胞群

                                          MID是三分群血液分析儀指標,一般包括正常時的Mon、E、B;病理時的各種原始幼稚細胞、異型淋巴細胞、漿細胞等。MID計數異?;驁缶?,需特別注意進行血涂片復查。由于各種儀器使用的稀釋液和溶血劑白細胞膜作用不一,因此,中間細胞群的確切細胞組成并不明確。

                                           

                                          ②未成熟粒細胞

                                          IG主要包括St、早幼粒細胞、中幼粒細胞、晚幼粒細胞,但不包括原始粒細胞。有助于篩檢、監測白血病反應、嚴重或慢性感染、炎癥、腫瘤、MDS、組織壞死。血培養陽性、IG%高于血培養陰性者,但靈敏度尚不足以用于預測感染或菌血癥,IG超過3%,對指示敗血癥非常特異,有助于微生物檢測評價。

                                           

                                          ③造血祖細胞

                                          HPC是反映以CD34陽性的造血祖細胞為主的參數,特別適合于外周造血干細胞移植過程,監測供體在接受藥物作用后外周血中造血干細胞的變化,便于選擇采集時機。

                                           

                                           

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